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人PBMC内cAMP含量测定radioimmunoassay.Briefly,细胞激活,在10毫升的硼硅玻璃管(康宁)以上所述。煮沸2分钟的样品被终止孵化。删除蛋白离心10分钟(4500克),上清摊薄免疫缓冲区和cAMP测定根据制造商的建议。在一些实验中,细胞孵育30分钟在PDE4的特异性抑制剂,咯利普兰(100微米)的甘油二酯(DAG)的存在刀豆蛋白激活激酶抑制剂R59022(10μM)前10分钟。存在

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人的PBMC阵营内容由放射免疫测定测量。简要地,细胞活化作用在10机器语言硼矽酸盐玻璃管(康宁)如上所述执行了。 孵出通过煮沸样品终止2 min。 离心法取消蛋白质(4500 g在10分钟), supernatants被稀释了根据需要immunoassay缓冲,并且阵营根据制造商的推荐被检验了。 在有些实验,细胞被预诱导在30分钟在PDE4具体抗化剂面前, rolipram (100 μM)或在10分钟在diacylglycerol (DAG)激酶抗化剂R59022 (10面前μM)在ConA活化作用之前。

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Camp 人外周血单个核放射免疫法测量。简单地说,如上文所述 10 毫升高硼硅玻璃管 (宁) 进行细胞激活。孵化而终止沸腾样品步行 2 分蛋白质被删除用离心法 (4500 g 10 分钟)、 清被稀释所必需的免疫检测缓冲区和营测定依法制造商的建议。一些实验,在单元格 preincubated PDE4 特定的抑制剂,咯 (100 μ M) 的存在 30 分钟或 10 分钟甘油二酯 (山) 激酶抑制剂 R59022 的存在 (10 μ M) 前 ConA 活化。

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该营地的内容是人类pbmc衡量的放射免疫测定。简单来说,手激活完成了所述的10-ML石英玻璃管(康宁)。 结束了曾人工孵化两批绿沸腾的样本以2分钟蛋白质被微离心机(4500G10min)supernatants被摊薄所要求的免疫测定缓冲区和难民营被测定根据制造商的建议。 在一些试验,细胞是preincubated为30分钟的存在的PED4-具体抑制剂,rolipram(100微米)或为10分钟的存在在diacylglycerol(达格·哈马舍尔)酶抑制剂R __LW_AT__59022(10μm)措纳激活之前。

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人的PBMC阵营内容由放射免疫测定测量。简要地,细胞活化作用在10机器语言硼矽酸盐玻璃管(康宁)如上所述执行了。 孵出通过煮沸样品终止2 min。 离心法取消蛋白质(4500 g在10分钟), supernatants被稀释了根据需要immunoassay缓冲,并且阵营根据制造商的推荐被检验了。 在有些实验,细胞被预诱导在30分钟在PDE4具体抗化剂面前, rolipram (100 μM)或在10分钟在diacylglycerol (DAG)激酶抗化剂R59022 (10面前μM)在ConA活化作用之前。
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